Sprouse ikizleri İtalya'nın Arezzo kentinin Clinica Tanganeli hastanesinde gözlerini açtılar. Anneleri İtalya'da ingilizce öğretmeniydi bu yüzden İtalya doğumlulardır.İkiz kardeşi Cole Sprouse'dan 15 dakika büyüktür. Dylan'ın anne-babası ünlü olması dileğiyle ona ünlü şair Dylan Thomas'ın adını vermişlerdir.[1]Daha 4 aylıkken Amerika'ya taşınmışlardır. Amerikan oyunculardır. Güney Kaliforniya'da büyüdü ve 6 aylıkken oyunculuğa başladı. İlk işi ikiz kardeşiyle beraber tuvalet kağıdı reklamında oynamaktı.
Anne ve babası Cole Sprouse ve Dylan Sprouse'yi daha güçlü bir insan haline getirmek için 1997 yılında boşanmışlardır. Etnik Kökeni ise Alman ve Cherokee Kızılderililerinden oluşuyor. ABD ve İtalya olmak üzere çifte vatandaşlıkları vardır.